在分子生物学的发展历程中，DNA测序技术的出现为基因组研究奠定了坚实的基础。其中，Sanger测序法因其准确性高、操作相对简单，成为早期基因测序的主要手段，并在许多领域中持续发挥着重要作用。本文将围绕“DNA Sanger测序法原理”进行详细阐述，帮助读者全面理解其工作原理与应用价值。

Sanger测序法由英国科学家弗雷德里克·桑格（Frederick Sanger）于1977年首次提出，因此得名。该方法的核心思想是利用链终止技术，通过控制DNA合成过程中的终止反应，从而确定DNA序列信息。这一方法的关键在于引入一种特殊的核苷酸——双脱氧核苷酸（ddNTP），它在DNA链延伸过程中能够随机终止合成反应。

在Sanger测序实验中，首先需要将目标DNA片段进行扩增，通常使用PCR技术以获得足够的模板。随后，将含有四种正常脱氧核苷酸（dNTP）以及少量双脱氧核苷酸（ddNTP）的反应体系进行处理。由于ddNTP缺乏3'-OH基团，一旦被掺入到正在延伸的DNA链中，就会导致链的终止。因此，在每一个反应体系中，会生成一系列长度不同的DNA片段，这些片段的末端均被特定的ddNTP所标记。

为了区分这四种不同的ddNTP，实验中通常会采用荧光标记或放射性同位素标记的方式。每个反应体系中仅加入一种特定的ddNTP，例如ddATP、ddTTP、ddCTP或ddGTP。通过电泳分离不同长度的DNA片段后，根据片段的迁移位置可以推断出原始DNA序列的信息。

Sanger测序法的一个显著优点是其高度的准确性，尤其适用于小片段DNA的测序。然而，随着高通量测序技术（如Illumina、PacBio等）的兴起，Sanger测序法在大规模基因组测序中的应用逐渐减少。尽管如此，它在某些特定场景下仍具有不可替代的优势，例如验证其他测序方法的结果、分析短片段突变或构建质粒图谱等。

总的来说，Sanger测序法作为DNA测序技术的奠基者，不仅推动了分子生物学的发展，也为后续测序技术的创新提供了重要的理论基础和实践指导。了解其基本原理，有助于我们更好地认识现代基因组学的研究方法和技术路径。